Metodología para la crioconservación de callos con estructuras embriogénicas obtenidos de inflorescencias inmaduras de la caña de azúcar (Saccharum spp. híbrido).

Abstract

a partir de inflorescencias inmaduras mediante un procedimiento simple de enfriamiento y mantener su capacidad regenerativa en el tiempo, sin afectar los indicadores fisiológicos y los rendimientos agrícola y agro-industrial. Como resultado, se estableció una metodología para la crioconservación de callos de caña de azúcar con estructuras embriogénicas a partir de inflorescencias con las siguientes etapas: selección de callos con tiempo postsubcultivo de 15 días; crioprotección con 0,3 mol.L-1 de sacarosa y 10,0% (v/v) de dimetilsulfóxido; procedimiento simple de enfriamiento con siembra de cristales de hielo a –8°C durante 5,0 s; y pre-congelación a -40ºC durante dos horas antes de realizar la inmersión en nitrógeno líquido. La metodología establecida se validó según los porcentajes de supervivencia y regeneración de plantas (plantas por 500 mg de callos) en condiciones in vitro a partir de callos crioconservados para: a) tres variedades (CP52-43: 89,0% y 150 plantas; C1051-73: 38,8% y 42 plantas; C91-301: 22,2% y 25 plantas); b) explantes procedentes de inflorescencias inmaduras (90,3% y 150 plantas), y explantes procedentes de hojas inmaduras de plantas in vitro (71,4% y 82 plantas); c) hasta 16 meses de almacenamiento en nitrógeno líquido para la variedad CP52-43 (90,0% y 140 plantas). La crioconservación provocó cambios significativos en la pérdida de electrolitos, la peroxidación lipídica, y el contenido de proteínas de las membranas celulares, restableciéndose a los cinco días de la recuperación post-descongelación. Las plantas regeneradas a partir de callos de caña de azúcar crioconservados y evaluadas en condiciones ex vitro mostraron estabilidad a nivel fenotípico en los indicadores fisiológicos y los rendimientos agrícola y agro-industrial a los 27 meses con dos ciclos de cultivo.